Methods and compositions are provided for detecting a primer extension
product in a reaction mixture. In the subject methods, a primer extension
reaction is conducted in the presence of a polymerase having 3'.fwdarw.5'
exonuclease activity and at least one FET labeled oligonucleotide probe
that includes a 3'.fwdarw.5' exonuclease resistant quencher domain. Also
provided are systems and kits for practicing the subject methods. The
subject invention finds use in a variety of different applications, and
are particularly suited for use in high fidelity PCR based reactions,
including SNP detection applications, allelic variation detection
applications, and the like.
De methodes en de samenstellingen worden verstrekt voor het ontdekken van een product van de inleidingsuitbreiding in een reactiemengsel. In de onderworpen methodes, wordt een reactie van de inleidingsuitbreiding in aanwezigheid van een polymerase geleid die 3'.fwdarw.5 ' exonucleaseactiviteit en minstens één FET geëtiketteerde oligonucleotide sonde heeft die een 3'.fwdarw.5 ' domein van exonuclease bestand quencher omvat. Op voorwaarde dat ook systemen en uitrustingen voor het uitoefenen van de onderworpen methodes zijn. De onderworpen uitvinding vindt gebruik in een verscheidenheid van verschillende toepassingen, en is bijzonder geschikt voor gebruik in hoge trouwpcr gebaseerde reacties, met inbegrip van SNP opsporingstoepassingen, allelic toepassingen van de variatieopsporing, en dergelijke.
