Mammalian two-hybrid system for screening for modulators of the accumulation of metabolic products

   
   

This invention utilizes a two-hybrid system to screen for agents that modulate the ability of a cell to degrade or to accumulate a metabolic product or to selective kill a cell or to selectively express a gene or cDNA in a cell that has a defect in its ability to degrade or to accumulate a metabolic product. One embodiment provides a mammalian cell comprising a nucleic acid encoding a peptide binding domain and an effector gene; a first chimeric protein comprising a nucleic acid binding domain that binds the peptide binding domain attached to the metabolic product or to a ligand that binds to the metabolic product; and a second chimeric protein comprising an expression control protein attached to the metabolic product or to the ligand that binds to the metabolic product such that when the first chimeric protein comprises the metabolic product, the second chimeric protein comprises the ligand and when the first chimeric protein comprises the ligand, the second chimeric protein comprises the metabolic product. The cell is contacted with a test agent and in alteration of expression of the effector gene is detected (if present) where a change in expression of the effector gene in response to the test agent indicates that the test agent modulates the ability of the cell to accumulate or degrade the metabolic product.

Esta invención utiliza un sistema del dos-hi'brido para defender para los agentes que modulan la capacidad de una célula de degradar o de acumular un producto metabólico o a la matanza selectiva una célula o de expresar selectivamente un gene o una DNA en una célula que tenga un defecto en su capacidad de degradar o de acumular un producto metabólico. Una encarnación proporciona una célula mamífera que abarca un ácido nucleic que codifica un dominio obligatorio del peptide y un gene effector; una primera proteína quimérica que abarcaba un dominio obligatorio del ácido nucleic que ata el dominio obligatorio del peptide unió al producto metabólico o a un ligand que ata al producto metabólico; y una segunda proteína quimérica que abarca una proteína del control de la expresión unida al producto metabólico o al ligand que ata al producto metabólico tales que cuando la primera proteína quimérica abarca el producto metabólico, la segunda proteína quimérica abarca el ligand y cuando la primera proteína quimérica abarca el ligand, la segunda proteína quimérica abarca el producto metabólico. La célula se entra en contacto con con un agente de la prueba y en la alteración de la expresión del gene effector se detecta (si presente) donde un cambio en la expresión del gene effector en respuesta al agente de la prueba indica que el agente de la prueba modula la capacidad de la célula de acumular o de degradar el producto metabólico.

 
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