Disclosed is a method for measuring a level of pyridinoline and/or
deoxypyridinoline in a sample. In the method, a non-hydrolyzed sample
containing one or more peptide-bound collagen pyridinium crosslinks
selected from the group consisting of pyridinoline, deoxypyridinoline, or
both, is contacted with a protease reagent under conditions effective for
the protease reagent to cleave the crosslinks from attached collagen amino
acids and peptides, so that peptide-bound forms are converted to native,
peptide-free pyridinoline and deoxypyridinoline. After proteolysis, the
level(s) of native, peptide-free pyridinoline and/or deoxypyridinoline are
measured. Preferably, proteolysis is effective to ensure that at least 80%
of total pyridinium crosslinks are present as the native, peptide-free
forms. The method is particularly useful in screening or monitoring
collagen degradation activity. Kits and reagents for use in the method are
also disclosed.
Αποκαλύπτεται μια μέθοδος για ένα επίπεδο pyridinoline ή/και deoxypyridinoline σε ένα δείγμα. Στη μέθοδο, ένα μη-υδρολυμένο δείγμα που περιέχει μια ή περισσότερες συνδεδεμένες διασυνδέσεις pyridinium κολλαγόνων που επιλέγονται από την ομάδα που αποτελείται και από το pyridinoline, το deoxypyridinoline, ή τα δύο, έρχεται σε επαφή με με ένα αντιδραστήριο πρωτεάσεων υπό τους όρους αποτελεσματικούς για το αντιδραστήριο πρωτεάσεων να διασπάσουν τις διασυνδέσεις από τα συνημμένα αμινοξέα και τα πεπτίδια κολλαγόνων, έτσι ώστε οι συνδεδεμένες μορφές μετατρέπονται στο εγγενή, πεπτίδιο-ελεύθερα pyridinoline και το deoxypyridinoline. Μετά από proteolysis, το επίπεδο (σ) εγγενούς, πεπτίδιο-ελεύθερου pyridinoline ή/και το deoxypyridinoline μετριούνται. Κατά προτίμηση, proteolysis είναι αποτελεσματικό να εξασφαλίσει ότι τουλάχιστον 80% των συνολικών διασυνδέσεων pyridinium είναι παρόντα ως εγγενείς, πεπτίδιο-ελεύθερες μορφές. Η μέθοδος είναι ιδιαίτερα χρήσιμη στη διαλογή ή τον έλεγχο της δραστηριότητας υποβάθμισης κολλαγόνων. Οι εξαρτήσεις και τα αντιδραστήρια για τη χρήση στη μέθοδο αποκαλύπτονται επίσης.
