Methods, compositions and articles of manufacture for assaying a sample for
an amplification product from a target polynucleotide are provided. An
amplification reaction is used to produce the amplification product from
the target polynucleotide so that it can be used to indirectly assay the
sample for the target polynucleotide. A sample suspected of containing the
target polynucleotide is contacted with first and second primers to
amplify the target polynucleotide; the first primer comprises a tag
sequence, the complement of which is formed on the opposite strand during
amplification and is referred to as a capture sequence. That opposite
strand is referred to as a second primer extension product or an
amplification product, and comprises a label. A capture probe is provided
that is conjugated to a substrate and can bind to the capture sequence to
form an amplification product detection complex. Methods of detecting the
amplification product thus produced are also provided, as are
amplification product assay arrays, along with methods of forming the
same. The methods are particularly useful in multiplex settings where a
plurality of target polynucleotides are to be assayed. Kits comprising
reagents for performing such methods are also provided.
Los métodos, las composiciones y los artículos de la fabricación para probar una muestra para un producto de la amplificación de un polynucleotide de la blanco se proporcionan. Una reacción de la amplificación se utiliza para producir el producto de la amplificación del polynucleotide de la blanco para poderla utilizar para probar indirectamente la muestra para el polynucleotide de la blanco. Una muestra sospechada de contener el polynucleotide de la blanco se entra en contacto con con primero y las segundas cartillas para amplificar el polynucleotide de la blanco; la primera cartilla abarca una secuencia de la etiqueta, el complemento de la cual se forma en el filamento opuesto durante la amplificación y se refiere como secuencia de la captura. Que enfrente de filamento está referido como un segundo producto superelegante de la extensión o producto de la amplificación, y abarca una etiqueta. Una punta de prueba de la captura es a condición de que se conjuga a un substrato y puede atar a la secuencia de la captura para formar un complejo de la detección del producto de la amplificación. Los métodos de detectar el producto de la amplificación producido así también se proporcionan, al igual que los órdenes del análisis del producto de la amplificación, junto con métodos de formar igual. Los métodos son particularmente útiles en ajustes múltiplexes donde está ser probada una pluralidad de polynucleotides de la blanco. Los kits que abarcan los reactivo para realizar tales métodos también se proporcionan.