A novel optical ruler based on ultrahigh-resolution colocalization of
single fluorescent probes is described. Two unique families of
fluorophores are used, namely energy-transfer fluorescent beads and
semiconductor nanocrystal (NC) quantum dots, that can be excited by a
single laser wavelength but emit at different wavelengths. A novel
multicolor sample-scanning confocal microscope was constructed which
allows one to image each fluorescent light emitter, free of chromatic
aberrations, by scanning the sample with nanometer scale steps using a
piezo-scanner. The resulting spots are accurately localized by fitting
them to the known shape of the excitation point-spread-function of the
microscope.
Una regla óptica de la novela basada en el colocalization de la ultraalto-resolucio'n de solas puntas de prueba fluorescentes se describe. Dos familias únicas de fluorophores se utilizan, a saber energi'a-transfieren los granos fluorescentes y los puntos nanocrystal del quántum del semiconductor (NC), que se pueden excitar por una sola longitud de onda del laser sino emitir en diversas longitudes de onda. Un microscopio confocal de la muestra-exploracio'n multicolor de la novela fue construido que no prohibe a uno a la imagen cada emisor ligero fluorescente, libre de aberraciones cromáticas, explorando la muestra con pasos de la escala del nanómetro usando un piezo-explorador. Los puntos que resultan son localizados exactamente cabiéndolos a la forma sabida de la punto-separar-funcio'n de la excitación del microscopio.
