Disclosed are Hansenula polymorpha mutants useful as host cells through
which various proteins can be produced as being intact at high yield and a
process for preparing recombinant proteins using the host cells. Using
various vectors, Hansenula polymorpha is made to be a mutant which is
deprived of methanol assimilating ability and incapable of utilizing
methanol as a carbon source. This Hansenula polymorpha mutant is used as a
high yield host to produce recombinant proteins without continuous feeding
of methanol, with the aid of an expression cassette carrying a promoter
capable of inducing the expression at a low concentration of methanol.
Further, the mutant is also lacking in carboxypeptidase Y, protease Y
and/or carboxypeptidase a activity, so the recombinant protein of interest
is not degraded at its carboxyl terminal when being expressed in the cell.
Thus, intact recombinant protein can be obtained. Also, there is disclosed
a pop-out technique in which a recombinant protein expression cassette is
inserted into a MOX gene site of the mutant and is allowed to pop out
therefrom, thereby utilizing the mutant as a host for general use in
producing various proteins of interest.
Показаны мутанты polymorpha hansenula полезные как ведущие ячейки через различные протеины можно произвести как был неповреждены на высоком выходе и процессе для подготовлять рекомбинатные протеины использующ ведущие ячейки. Использующ различные векторы, polymorpha hansenula сделано для того чтобы быть мутантом который лишен метанола ассимилируя способность и неспособно использовать метанол как источник углерода. Этот мутант polymorpha hansenula использован по мере того как высокий хозяин выхода для того чтобы произвести рекомбинатные протеины без непрерывный подавать метанола, с помощью кассеты выражения нося promoter способный наводить выражение на низкой концентрации метанола. Более потом, мутант также нуждается в карбоксипептидазе ы, протеазе ы and/or карбоксипептидазе деятельность, поэтому рекомбинатный протеин интереса не ухудшен на своем карбоксильном стержне когда выражаемо в клетке. Таким образом, неповрежденный рекомбинатный протеин можно получить. Также, показанное xlopaht-vne метод в котором рекомбинатная кассета выражения протеина введена в место гена MOX мутанта и позволена хлопнуть вне therefrom, таким образом используя мутант как хозяин для общего пользования в производить различные протеины интереса.
