A single chain variable fragment (ScFv) antibody from a monoclonal antibody
(Mab) against Venezuelan equine encephalitis (VEE) virus, is generated by
cloning linked variable regions of the heavy (V.sub.H) and the light
(V.sub.L) chain antibody genes. Mab clone 1A.sub.4 A.sub.1 in E. coli
strain TG-1 was successfully cloned as ScFv. Results were reproduced in E.
coli strain HB2151, expressing the same clone, A116, though displaying
weak binding specificity to VEE due to a frame shift in the N-terminal
region of the V.sub.L domain, upstream to the complementarity-determining
region 1. A PCR-based site-directed mutagenesis approach was adopted to
re-introduce the three single-base deletions in the 5 prime region of the
V.sub.L gene of A116, corresponding to framework-1 region, producing
mutant MA116, correcting a localized frame-shift in framework-1 region to
consensus framework-1 amino acid sequence. A MA116 clone, MA116-15, shows
comparable reactivity to the parental Mab in recognizing VEE antigen.
Одиночное цепное переменное антитело части (ScFv) от моноклонального антитела (mab) против венесуэльского equine вируса энцефалита (VEE), произведено зонами соединенными клонированием переменными тяжелых (V.sub.H) и светлых (V.sub.L) цепных генов антитела. Клон 1A.sub.4 A.sub.1 mab в напряжении TG-1 E coli успешно был клонирован по мере того как СчФв. Результат было воспроизведено в е. напряжение HB2151 coli, выражая такой же клон, A116, однако показывая слабую binding характерность к VEE должному к переносу рамки в зоне Н-sterjn4 домена V.sub.L, перед к комплементарност-obuslovliva4 зоне 1. PCR-based мест-napravilo подход к мутагенеза было принято для того чтобы re-introduce 3 пропускания одиночн-osnovani4 в основной зоне 5 гена V.sub.L A116, соответствующ к зоне framework-1, производящ мутант MA116, исправляя локализованное рамк-perenosit в зону framework-1 к последовательности amino acid консенсуса framework-1. MA116 клон, MA116-15, показывает соответствующую реактивность к родительскому mab в узнавать VEE антиген.
