The invention relates to methods, compositions, and systems for calibrating
a fluorescent polynucleotide separation apparatus. One aspect of the
invention is multiple color calibration standards and their use. A
multiple color calibration standard is a mixture of at least two
polynucleotides of different length, wherein each of the polynucleotides
is labeled with a spectrally distinct fluorescent dye. Another aspect of
the invention is to produce total emission temporal profiles of multiple
color calibration standards for use in calibrating fluorescent
polynucleotide separation apparatus. The peaks corresponding to the
fluorescently labeled polynucleotides in the total emission temporal
profile may be detected using a peak detector that is driven by changes in
the slopes of the total emission temporal profile. Calibration of
fluorescent polynucleotide separation apparatus, with various embodiments
of the methods of the invention, includes the step of identification of
the labeled polynucleotides of the multiple color calibration standards.
The process of spectral calibration of a fluorescent polynucleotide
separation apparatus using a multiple color calibration standard may
include the step of the estimating (extracting) of the dyes' reference
spectra, using information from the peak detection process performed on
the total emission temporal profile. Other aspects of the invention
include systems for separating and detecting fluorescently labeled
polynucleotides, wherein the system is designed for spectral calibration
in accordance with the subject calibration methods employing multiple
color calibration standards. Another aspect of the invention is methods
and compositions for detecting the flow of electrical current through a
separation channel of a fluorescent polynucleotide separation apparatus.
These methods and compositions employ monitoring dyes. Monitoring dyes are
fluorescent dyes that are spectrally distinct from the dye on the
polynucleotide intended to convey genetic information, e.g., fluorescent
polynucleotide sequencing reaction products.
L'invention concerne des méthodes, des compositions, et des systèmes pour calibrer un appareillage fluorescent de séparation de polynucleotide. Un aspect de l'invention est des normes multiples de calibrage de couleur et leur utilisation. Une norme multiple de calibrage de couleur est un mélange au moins de deux polynucleotides de longueur différente, où chacun des polynucleotides est marqué avec un colorant fluorescent spectralement distinct. Un autre aspect de l'invention doit produire des profils temporels d'émission totale des normes multiples de calibrage de couleur pour l'usage en calibrant l'appareillage fluorescent de séparation de polynucleotide. Les crêtes correspondant aux polynucleotides fluorescently marqués dans le profil temporel d'émission totale peuvent être détectées employer un détecteur maximal qui est conduit par des changements des pentes du profil temporel d'émission totale. Le calibrage de l'appareillage fluorescent de séparation de polynucleotide, avec de diverses incorporations des méthodes de l'invention, inclut l'étape de l'identification des polynucleotides marqués des normes multiples de calibrage de couleur. Le processus du calibrage spectral d'un appareillage fluorescent de séparation de polynucleotide employant une norme multiple de calibrage de couleur peut inclure l'étape d'estimer (extraire) des spectres de la référence des colorants, en utilisant l'information du procédé maximal de détection effectué sur le profil temporel d'émission totale. D'autres aspects de l'invention incluent des systèmes pour séparer et détecter les polynucleotides fluorescently marqués, où le système est conçu pour le calibrage spectral selon les méthodes soumises de calibrage utilisant des normes multiples de calibrage de couleur. Un autre aspect de l'invention est des méthodes et des compositions pour détecter l'écoulement du courant électrique par un canal de séparation d'un appareillage fluorescent de séparation de polynucleotide. Ces méthodes et compositions utilisent surveiller des colorants. En surveillant des colorants soyez des colorants fluorescents qui sont spectralement distincts du colorant sur le polynucleotide prévu pour donner l'information génétique, par exemple, polynucleotide fluorescent ordonnançant des produits de réaction.
