Method of removing n-terminal alanine residues from polypeptides with aeromonas aminopeptidase

   
   

This invention describes a method of removing N-terminal alanine residues from polypeptides, preferably recombinant proteins, using an aminopeptidase derived from the marine bacterium Aeromonas proteolytica. Accordingly, Aeromonas aminopeptidase (AAP; E.C. 3.4.11.10) can be used to remove N-terminal alanyl residues from derivatives of human somatotropin (hST, human growth hormone, or hGH), porcine somatotropin (pST), and bovine somatotropin (bST), for example, to yield proteins having their native amino acid sequences. The enzyme reactions can be carried out in free solution, or the AAP can be immobilized on a solid support, for reactions carried out in vitro. An efficient method for converting Ala-hGH to hGH, for example, comprises expression of Ala-hGH in E. coli, recovery of inclusion bodies, solubilization and refolding in detergent, detergent removal by ultrafiltration, selective precipitation, enzyme cleavage, followed by two column chromatography steps.

Deze uitvinding beschrijft een methode om n-Eindalanine residu's uit polypeptiden, bij voorkeur recombinante proteïnen te verwijderen, gebruikend aminopeptidase die uit mariene bacterieaeromonas proteolytica wordt afgeleid. Dienovereenkomstig, Aeromonas aminopeptidase (AAP; E.G. 3.4.11.10) kan worden gebruikt om n-Eindalanylresidu's uit derivaten van menselijke somatotropin (hST, menselijk de groeihormoon, of hGH), varkenssomatotropin (pST), en rundersomatotropin (bST) te verwijderen, bijvoorbeeld, om proteïnen op te brengen die hun inheemse aminozuuropeenvolgingen hebben. De enzymreacties kunnen in vrije oplossing worden uitgevoerd, of AAP kan op een stevige steun, voor in vitro uitgevoerde reacties worden geïmmobiliseerd. Een efficiënte methode om ala-HGH in hGH om te zetten, bijvoorbeeld, bestaat uit uitdrukking van ala-HGH in E. coli, terugwinning van opnemingsorganismen, oplosbaar maken en het refolding in detergent, detergent verwijdering door ultrafiltratie, selectieve precipitatie, enzymsplijten, dat door twee stappen van de kolomchromatografie wordt gevolgd.

 
Web www.patentalert.com

< Automatic detergent dispensing system for a warewasher

< Filtration media of porous inorganic particles

> Indicator kit

> Detergent compositions comprising an encapsulated percarbonate compound

~ 00134