This invention provides methods of obtaining novel polynucleotides and
encoded polypeptides by the use of non-stochastic methods of directed
evolution (DirectEvolution.TM.). A particular advantage of
end-selection-based methods is the ability to recover full-length
polynucleotides from a library of progeny molecules generated by
mutagenesis methods. These methods include non-stochastic polynucleotide
site-saturation mutagenesis (Gene Site Saturation Mutagenesis.TM.) and
non-stochastic polynucleotide reassembly (GeneReassembly.TM.). This
invention provides methods of obtaining novel enzymes that have optimized
physical &/or biological properties. Through use of the claimed methods,
genetic vaccines, enzymes, small molecules, and other desirable molecules
can be evolved towards desirable properties. For example, vaccine vectors
can be obtained that exhibit increased efficacy for use as genetic
vaccines. Vectors obtained by using the methods can have, for example,
enhanced antigen expression, increased uptake into a cell, increased
stability in a cell, ability to tailor an immune response, and the like.
Furthermore, this invention provides methods of obtaining a variety of
novel biologically active molecules, in the fields of antibiotics,
pharmacotherapeutics, and transgenic traits.
Αυτή η εφεύρεση παρέχει τις μεθόδους νέα polynucleotides και κωδικοποιημένα polypeptides με την χρήση των μη-πιθανολογικών μεθόδων κατευθυνόμενης εξέλιξης (DirectEvolution. TM). Ένα ιδιαίτερο πλεονέκτημα των τέλος-επιλογή-βασισμένων στον μεθόδων είναι η δυνατότητα να ανακτηθούν ολόκληρα polynucleotides από μια βιβλιοθήκη των μορίων απογόνων που παράγονται με τις μεθόδους μεταλλαξιγένεσης. Αυτές οι μέθοδοι περιλαμβάνουν την μη-πιθανολογική polynucleotide μεταλλαξιγένεση περιοχή-κορεσμού (μεταλλαξιγένεση TM κορεσμού περιοχών γονιδίων.) και μη-πιθανολογική polynucleotide επανασυναρμολόγηση (GeneReassembly. TM). Αυτή η εφεύρεση παρέχει τις μεθόδους τα νέα ένζυμα που έχουν βελτιστοποιήσει τις φυσικές &/ορ βιολογικές ιδιότητες. Μέσω της χρήσης των απαιτημένων μεθόδων, τα γενετικά εμβόλια, τα ένζυμα, τα μικρά μόρια, και άλλα επιθυμητά μόρια μπορούν να εξελιχθούν προς τις επιθυμητές ιδιότητες. Παραδείγματος χάριν, τα διανύσματα εμβολίων μπορούν να ληφθούν που εκθέτουν την αυξανόμενη αποτελεσματικότητα για τη χρήση ως γενετικά εμβόλια. Τα διανύσματα που λαμβάνονται με τη χρησιμοποίηση των μεθόδων μπορούν, παραδείγματος χάριν, να έχουν ενισχύσει την έκφραση αντιγόνων, την αυξανόμενη λήψη σε ένα κύτταρο, την αυξανόμενη σταθερότητα σε ένα κύτταρο, τη δυνατότητα να προσαρμοστεί μια άνοση απάντηση, και τους ομοίους. Επιπλέον, αυτή η εφεύρεση παρέχει τις μεθόδους ποικίλα νέα βιολογικά ενεργά μόρια, στους τομείς των αντιβιοτικών, του pharmacotherapeutics, και των διαγενετικών γνωρισμάτων.
