An oligonucleotide, labeled with a molecular energy transfer trio and
containing two sequences capable of hairpin formation, is used in the
detection of two targets by irradiation with a single wavelength of light.
One of the two sequences contains an energy donor and a first energy
acceptor, and the other sequence contains a second energy acceptor. The
donor is in close proximity to the second acceptor only if the hairpin is
formed, while the donor is always in close proximity to first acceptor. A
sample is assayed, using this oligonucleotide in conjunction with another
oligonucleotide which contains the donor fluorophore and the quencher,
arranged as described above, but which lacks the acceptor fluorophore. The
present oligonucleotide and the other oligonucleotide are specific to
first and second targets, respectively. If a sample contains the first and
second targets, then hairpin formation is prevented after each
oligonucleotide is incorporated into a target amplification product or
hybridized to a target. Subsequent irradiation of the sample with the
single wavelength of light which excites the donor fluorophore, but not
the acceptor fluorophore, causes two distinctive signals to be generated.
The first signal is emitted by the second fluorophore of the present
oligonucleotide, while the second signal is emitted by the first
fluorophore of the other oligonucleotide. Thus, the first and second
targets are detected when one observes the first and second signals,
respectively.
Un oligonucléotide, marqué avec un trio moléculaire de transfert d'énergie et contenir deux ordres capables de la formation d'épingle à cheveux, est employé dans la détection de deux cibles par irradiation avec une longueur d'onde simple de lumière. Un des deux ordres contient un donateur d'énergie et un premier accepteur d'énergie, et l'autre ordre contient un deuxième accepteur d'énergie. Le donateur est dans la proximité étroite au deuxième accepteur seulement si l'épingle à cheveux est formée, alors que le donateur est toujours dedans proximité étroite au premier accepteur. Un échantillon est analysé, en utilisant cet oligonucléotide en même temps qu'un autre oligonucléotide qui contient le fluorophore de distributeur et l'extincteur, disposé comme décrit ci-dessus, mais qui manque du fluorophore d'accepteur. L'oligonucléotide actuel et l'autre oligonucléotide sont spécifiques à d'abord et les deuxièmes cibles, respectivement. Si un échantillon contient les premières et deuxièmes cibles, alors la formation d'épingle à cheveux est empêchée après que chaque oligonucléotide soit incorporé à un produit d'amplification de cible ou hybridé à une cible. Irradiation suivante de l'échantillon avec la longueur d'onde simple de la lumière qui excite le fluorophore de distributeur, mais pas le fluorophore d'accepteur, causes deux signaux distinctifs pour être produit. Le premier signal est émis par le deuxième fluorophore de l'oligonucléotide actuel, alors que le deuxième signal est émis par le premier fluorophore de l'autre oligonucléotide. Ainsi, les premières et deuxièmes cibles sont détectées quand on observe les premiers et deuxièmes signaux, respectivement.
