Here we describe the molecular identification of a cDNA encoding a novel
serine protease we have termed D-G. The deduced amino acid sequence, and
it's alignment with other well characterized serine proteases clearly
indicates that it is a member of the S1 serine protease family. We have
found that the protease D-G mRNA is widely expressed in several tissues
throughout the body including epidermis, fibroblasts, keratinocytes,
colon, small intestine, stomach, lung, kidney, bone marrow, lymph node,
thymus, ovary, prostate, uterus and spinal cord. Interestingly, this
protease contains a hydrophobic stretch of amino acids which is a putative
transmembrane near the NH.sub.2 -terminus. Thus, this serine protease is
thought to be synthesized as a type II integral protein. We expressed a
soluble form of this novel human protease by inserting the portion of the
protease D-G cDNA, encoding the catalytic domain, in a zymogen activation
construct designed to permit the generic activation of heterologous serine
protease catalytic domains. The result is an active preparation of
protease D-G that has an activity against a subset of amidolytic
substrates. This enzymatically active protease D-G preparation is now
amenable to further biochemical analyses for the identification of
physiological substrates as well as specific inhibitors.
Ici nous décrivons l'identification moléculaire d'une ADN codant une protéase de sérine de roman que nous avons nommé la dg. L'ordre déduit d'acide aminé, et c'est alignement avec d'autres protéases bien caractérisées de sérine indique clairement que c'est un membre de la famille de protéase de la sérine S1. Nous avons constaté que le mRNA de dg de protéase est largement exprimé en plusieurs tissus dans tout le corps comprenant l'épiderme, les fibroblastes, les keratinocytes, les deux points, le petit intestin, l'estomac, le poumon, le rein, la moelle, le noeud de lymphe, le thymus, l'ovaire, la prostate, l'utérus et le cordon médullaire. Intéressant, cette protéase contient un bout droit hydrophobe des acides aminés qui est une transmembrane putative près du NH.sub.2 - terminus. Ainsi, on pense cette protéase de sérine pour être synthétisé comme type protéine d'intégrale de II. Nous avons exprimé une forme soluble de cette protéase humaine de roman en insérant la partie de l'ADN de dg de protéase, codant le domaine catalytique, dans une construction d'activation de zymogène conçue pour permettre l'activation générique des domaines catalytiques de protéase hétérologue de sérine. Le résultat est une préparation active de la dg de protéase qui a une activité contre un sous-ensemble de substrats amidolytic. Cette préparation enzymatiquement active de dg de protéase est maintenant favorable encore d'autres à analyses biochimiques pour l'identification des substrats physiologiques aussi bien que les inhibiteurs spécifiques.
