Recombinant respiratory syncytial virus (RSV) are provided in which
expression of the second translational open reading frame encoded by the
M2 gene (M2ORF2) is reduced or ablated to yield novel RSV vaccine
candidates. Expression of M2 ORF2 is reduced or ablated by modifying a
recombinant RSV genome or antigenome to incorporate a frame shift
mutation, or one or more stop codons in M2 ORF2. Alternatively, M2 ORF2 is
deleted in whole or in part to render the M2-2 protein partially or
entirely non-functional or to disrupt its expression altogether. M2 ORF2
deletion and knock out mutants possess highly desirable phenotypic
characteristics for vaccine development. These changes specify one or more
desired phenotypic changes in the resulting virus or subviral particle.
Vaccine candidates are generated that show a change in mRNA transcription,
genomic or antigenomic RNA replication, viral growth characteristics,
viral antigen expression, viral plaque size, and/or a change in
cytopathogenicity. In addition, M2-2 knock out or deletion virus exhibits
increased levels of synthesis of viral proteins in cell culture, providing
an enriched source of viral antigen or protein for purification and use as
a noninfectious subunit vaccine.
Ο ανασυνδυαζόμενος αναπνευστικός syncytial ιός (RSV) παρέχεται στον οποίο η έκφραση του δεύτερου μεταφραστικού ανοικτού πλαισίου ανάγνωσης που κωδικοποιείται από το γονίδιο τετρ.μέτρου (M2ORF2) μειώνεται ή αφαιρείται για να παραγάγει τους νέους υποψηφίους εμβολίων RSV. Η έκφραση του τετρ.μέτρου ORF2 μειώνεται ή αφαιρείται από την τροποποίηση ενός ανασυνδυαζόμενου γονιδιώματος RSV ή antigenome για να ενσωματώσει μια μεταλλαγή μετατόπισης πλαισίων, ή ένα ή περισσότερα codons στάσεων στο τετρ.μέτρο ORF2. Εναλλακτικά, το τετρ.μέτρο ORF2 διαγράφεται γενικά ή εν μέρει για να καταστήσει την πρωτεϊ'νη τετρ.μέτρο-2 μερικώς ή εξ ολοκλήρου μη λειτουργική ή για να αναστατώσει την έκφρασή του συνολικά. Τα τετρ.μέτρα ORF2 μεταλλάξεις διαγραφής και κτύπου έξω κατέχουν τα ιδιαίτερα επιθυμητά φαινοτυπικά χαρακτηριστικά για την ανάπτυξη εμβολίων. Αυτές οι αλλαγές διευκρινίζουν μια ή περισσότερες επιθυμητές φαινοτυπικές αλλαγές στον προκύπτοντα ιό ή το subviral μόριο. Οι υποψήφιοι εμβολίων παράγονται που παρουσιάζουν μια αλλαγή στη μεταγραφή mRNA, την genomic ή antigenomic αντένσταση RNA, τα προερχόμενα από ιό χαρακτηριστικά αύξησης, την προερχόμενη από ιό έκφραση αντιγόνων, το προερχόμενο από ιό μέγεθος πινακίδων, ή/και μια αλλαγή στο cytopathogenicity. Επιπλέον, ο κτύπος τετρ.μέτρο-2 έξω ή ο ιός διαγραφής εκθέτει τα αυξανόμενα επίπεδα σύνθεσης των προερχόμενων από ιό πρωτεϊνών στην κυτταροκαλλιέργεια, που παρέχει μια εμπλουτισμένη πηγή προερχόμενης από ιό αντιγόνου ή πρωτεϊ'νης για τον καθαρισμό και τη χρήση ως μη μολυσματικό εμβόλιο υπομονάδων.
