Methods for detection of gamma-secretase activity and identification of inhibitors thereof

   
   

The present invention provides an isolated, functionally-active protein that catalyzes cleavage of a gamma-secretase substrate. The functional activity of the isolated protein suggests that the isolated protein includes gamma-secretase. In one embodiment, the isolated gamma-secretase protein is associated with PS1. The present invention also relates to homogeneous methods for monitoring cleavage of .beta.-amyloid precursor protein (.beta.APP) by gamma-secretase, wherein the steps of of isolating and retrieving cleavage products have been eliminated. Cleavage can be detected by binding a pair of fluorescent adducts to the gamma-cleaved .beta.APP fragment. Preferably, a first fluorescent adduct binds to the carboxy-terminal end of the gamma-cleaved .beta.APP fragment, with substantially no cross-reactivity to uncleaved .beta.APP or to other types of gamma-cleaved .beta.APP fragments, while a second fluorescent adduct binds to a portion within the amino-terminal region on the gamma-cleaved .beta.APP fragment. Detection of binding to the gamma-cleaved .beta.APP fragment is determined by monitoring the fluorescent energy transfer between the adducts.

La presente invenzione fornisce una proteina isolata e funzionale-attiva che catalizza la fenditura di un substrato di gamma-secretase-secretase. L'attività funzionale della proteina isolata suggerisce che la proteina isolata include il gamma-secretase-secretase. In un incorporamento, la proteina isolata di gamma-secretase-secretase è associata con PS1. La presente invenzione inoltre si riferisce ai metodi omogenei per il controllo della fenditura della proteina del precursore dell'beta.-amiloide (beta.APP) da gamma-secretase-secretase, in cui i punti di isolamento e di richiamo dei prodotti di fenditura sono stati eliminati. La fenditura può essere rilevata legando un accoppiamento dei complessi fluorescenti al frammento gamma-fenduto del beta.APP. Preferibilmente, un primo complesso fluorescente si lega all'estremità del carboxy-terminale del frammento gamma-fenduto del beta.APP, con sostanzialmente nessun reattività crociata a uncleaved il beta.APP o ad altri tipi di frammenti gamma-fenduti del beta.APP, mentre un secondo complesso fluorescente si lega ad una parte all'interno della regione del amminico-terminale sul frammento gamma-fenduto del beta.APP. La rilevazione di legarsi al frammento gamma-fenduto del beta.APP è determinata controllando il trasferimento di energia fluorescente fra i complessi.

 
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< Prevention and treatment of amyloidogenic disease

< Tandem fluorescent protein constructs

> Alzheimer's disease secretase, APP substrates therefor, and uses therefor

> Modulation of A.beta. levels by .beta.-secretase BACE2

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