Methods, compositions and articles of manufacture for assaying a sample for
a GHB source are provided. A sample suspected of containing a GHB source
is contacted with a first oxidoreductase selective for GHB and an oxidized
cofactor. In the presence of GHB in the sample, the first oxidoreductase
oxidizes GHB to succinic semialdehyde and reduces the cofactor. The
reduced cofactor thus produced can be detected directly, or a hydride
abstractor can be used that abstracts a hydride from the reduced cofactor
and produces a detectable change. The hydride abstractor can be a second
oxidoreductase that oxidizes the reduced cofactor and produces a
detectable change in a chromogen or dye. Preferably a visual change is
produced, allowing performance of the assay outside of a laboratory
setting. Fusion proteins comprising the first oxidoreductase,
polynucleotides encoding such proteins, host cells expressing such
proteins, and vectors comprising such polynucleotides are also provided.
Stabilized formulations of the first oxidoreductase are also provided.
Test supports, devices, and compositions and kits comprising reagents for
performing such methods are also provided. Techniques for performing the
assay in the presence of ethanol and in the presence of GHB precursors in
the sample are also provided.
Os métodos, as composições e os artigos da manufatura para assaying uma amostra para uma fonte de GHB são fornecidos. Uma amostra suspeitada de conter uma fonte de GHB é contatada com um primeiro oxidoreductase seletivo para GHB e um cofactor oxidado. Na presença de GHB na amostra, o primeiro oxidoreductase oxida GHB ao semialdehyde succinic e reduz o cofactor. O cofactor reduzido produzido assim pode ser detectado diretamente, ou um abstractor do hydride pode ser usado que abstraia um hydride do cofactor reduzido e produza uma mudança detectável. O abstractor do hydride pode ser um segundo oxidoreductase que oxide o cofactor reduzido e produza uma mudança detectável em um chromogen ou em uma tintura. Uma mudança visual é produzida preferivelmente, permitindo o desempenho do assay fora de um ajuste do laboratório. As proteínas da fusão que compreendem o primeiro oxidoreductase, os polynucleotides que codificam tais proteínas, as pilhas de anfitrião que expressam tais proteínas, e os vetores que compreendem tais polynucleotides são fornecidas também. Os formulations estabilizados do primeiro oxidoreductase são fornecidos também. As sustentações, os dispositivos, e as composições e os jogos do teste que compreendem reagents para executar tais métodos são fornecidos também. As técnicas para executar o assay na presença do ethanol e na presença de precursors de GHB na amostra são fornecidas também.
