BLAST search was done on the EST database by using various nucleotide
sequences encoding known bromodomain motifs to discover several ESTs
likely encoding bromodomain genes. Next, testicular cDNAs were PCR cloned
by using primers designed based on the sequence of EST (W17142), which is
one of the ESTs discovered above. By using the thus obtained PCR product
as a probe, the testicular library was screened. The obtained cDNA clone
was used as a probe to re-screen the testicular cDNA library, thereby
successfully isolating a full-length cDNA corresponding to EST (W17142).
The protein encoded by the thus isolated cDNA had, in addition to the
bromodomain, several regions and domains conserved in transcription
regulatory factors. Moreover, the protein interacted with proteins
associated with the chromatin-mediated transcriptional regulatory
mechanism and a transcription co-activator.
Onderzoek van de ONTPLOFFING werd gedaan op het Est- gegevensbestand door diverse nucleotideopeenvolgingen te gebruiken coderend bekende bromodomain motieven om verscheidene waarschijnlijke coderende bromodomain genen te ontdekken ESTs. Volgende, testicular DNAS waren PCR die door ontworpen te gebruiken inleidingen wordt gekloond die op de opeenvolging van EST worden gebaseerd (W17142), die één van hierboven ontdekte ESTs is. Door het zo verkregen PCR product als sonde te gebruiken, was de testicular bibliotheek onderzocht. De verkregen kloon DNA werd gebruikt als sonde re-scherm de testicular bibliotheek DNA, daardoor met succes isolerend een DNA van gemiddelde lengte beantwoordend aan EST (W17142). De proteïne die door zo geïsoleerde DNA wordt gecodeerd had, naast bromodomain, verscheidene gebieden en domeinen die in transcriptie regelgevende factoren worden behouden. Voorts stond de proteïne met proteïnen verbonden aan het chromatin-bemiddelde transcriptional regelgevende mechanisme en een transcriptie mede-activator in wisselwerking.
