The invention relates to methods of introducing a heterologous DNA sequence into a mouse embryonic stem cell wherein the DNA sequence is inserted by homologous recombination into a villin gene/I-SceI hybrid by creating a double strand break with I-SceI meganuclease. Subsequently, the mouse embryonic stem cells can be used to generate a transgenic mouse comprising the heterologous DNA sequence. Additionally, the methods can be used for gene replacement in ovo where a mouse oocyte containing a villin gene/I-SceI hybrid within its genome exists or is first generated. More generally, the methods can be used for the targeted insertion of a heterologous DNA sequence into any cell containing a villin gene/I-SceI hybrid sequence within its genome.

L'invention concerne des méthodes de présenter un ordre hétérologue d'ADN dans une cellule de tige embryonnaire de souris où l'ordre d'ADN est inséré par recombinaison homologue dans un hybride du villin gene/I-SceI en créant une double coupure de rive avec le meganuclease d'I-SceI. Plus tard, les cellules de tige embryonnaires de souris peuvent être employées pour produire d'une souris transgénique comportant l'ordre hétérologue d'ADN. En plus, les méthodes peuvent être employées pour le remplacement de gène dans l'ovo où un oocyte de souris contenant un hybride du villin gene/I-SceI dans son génome existe ou est d'abord produit. Plus généralement, les méthodes peuvent être employées pour l'insertion visée d'un ordre hétérologue d'ADN dans n'importe quelle cellule contenant un ordre hybride du villin gene/I-SceI dans son génome.