A cell-free system based on the cytosol of normally growing cells, which
reproduces measurable aspects of the apoptotic program, is provided. The
apoptotic program is initiated by addition of DATP in the specific
exemplification of the HeLa 100,000.times.g supernatant. Fractionation of
the cytosol yielded a 15 kDa protein, identified by absorption spectrum
and protein sequence as cytochrome c, that is required for in vitro
apoptosis. Elimination of cytochrome c from cytosol by immunodepletion or
inclusion of sucrose to stabilize mitochondria during cytosol preparation,
diminished the apoptotic activity. Addition of exogenous cytochrome c to
cytochrome c-depleted extracts restored apoptotic activity. Cells
undergoing apoptosis in vivo showed increased release of cytochrome c to
their cytosol, suggesting that mitochondria may function in apoptosis by
releasing cytochrome c.
Un sistema sin células basado en el cytosol de células normalmente cada vez mayor, que reproduce aspectos mensurables del programa apoptotic, se proporciona. El programa apoptotic es iniciado por la adición de DATP en el exemplification específico del supernatant heLa 100,000.times.g. El fraccionamiento del cytosol rindió a 15 la proteína del kDa, identificada por espectro de absorción y secuencia de la proteína como cytochrome c, que se requiere para el apoptosis in vitro. Eliminación del cytochrome c del cytosol por el immunodepletion o inclusión de la sucrosa para estabilizar los mitochondria durante la preparación del cytosol, disminuida la actividad apoptotic. La adición del cytochrome exógeno c al cytochrome c-agoto' los extractos restauró actividad apoptotic. Las células que experimentaban apoptosis in vivo demostraron el lanzamiento creciente del cytochrome c a su cytosol, sugiriendo que los mitochondria pueden funcionar en apoptosis lanzando el cytochrome c.
