Novel and improved processes for isolating organophosphorus hydrolase
enzyme from an aqueous solution and obtaining substantially purified
enzyme at high yield are provided, as well as compositions, including
storage stable lyophilyzed organophosphorus hydrolase enzyme compositions,
that are prepared by the provided methods. The organophosphorus hydrolase
enzyme is purified by contacting an aqueous solution of cell free
bacterial proteins with a strong cation exchange resin, the aqueous
solution comprising soluble organophosphorus hydrolase enzyme, washing the
strong cation exchange resin with a washing buffer to remove unbound
proteins from the strong cation exchange resin, eluting proteins that
remain bound to the strong cation exchange resin by washing the resin with
an eluting buffer comprising salt in a concentration that starts at about
zero and is raised during the eluting process to about 0.5M, and detecting
and collecting eluate comprising a protein having organophosphorus
hydrolase enzyme activity. All processing steps are conducted at a pH that
is less than the isoelectric point of the organophosphorus hydrolase
enzyme.
Roman und verbesserte Prozesse für das Lokalisieren des organophosphorigen Hydrolaseenzyms von einer wässerigen Lösung und das Erhalten des im wesentlichen gereinigten Enzyms am hohen Ergebnis werden, sowie Aufbau, einschließlich Speicherstall lyophilyzed organophosphorigen Hydrolaseenzymaufbau zur Verfügung gestellt, der durch die zur Verfügung gestellten Methoden vorbereitet werden. Das organophosphorige Hydrolaseenzym wird gereinigt, indem man frei mit einer wässerigen Lösung Zelle der bakteriellen Proteine mit einem starken Kationenaustauschharz, die wässerige Lösung in Verbindung tritt, die das lösliche organophosphorige Hydrolaseenzym enthält und das starke Kationenaustauschharz mit einem waschenden Puffer wäscht, um ungebundene Proteine vom starken Kationenaustauschharz zu entfernen und Proteine eluiert, die Grenze zum starken Kationenaustauschharz bleiben, indem sie das Harz mit einem eluierenden Puffer waschen, der Salz in einer Konzentration enthält, die Anfänge an ungefähr null und während des eluierenden Prozesses bis ungefähr 0.5M und des Ermittelns und des Sammelns des Eluats aufgeworfen wird, das ein Protein enthält, das organophosphorige Hydrolaseenzymaktivität hat. Alle Verarbeitungsschritte werden bei einem pH, der kleiner ist, als der isoelektrische Punkt des organophosphorigen Hydrolaseenzyms geleitet.