Chemiluminescent detection of molecules of synthetic or natural origin such as proteins and nucleic acids (DNA and RNA), as well as other biologic molecules, is increasingly replacing radioactive detection as the method of choice where sensitivity is critical. In such assays, luminescence is customarily achieved by the oxidation of a luminol or isoluminol substrate in the presence of an oxidizing agent such as hydrogen peroxide or hydrogen peroxide source, such as perborate, and a peroxidase catalyst such as horseradish peroxidase. To obtain useful levels of luminescence (e.g., detectable levels) by customary techniques, a luminescent enhancer is also present during oxidation. It has been found in the practice of the present invention that azine enhancers have contained an impurity which reduces the properties of the chemiluminescent assay working solutions. The present invention describes a working solution, a process of using the working solution, and kits containing solutions which can be mixed to form the working solutions comprising a solution which is useful for the chemiluminescent assay of peroxidase activity comprising: a) at least one chemiluminescent cyclic diacylhydrazide, b) at least one azine enhancer, and c) at least one oxidizine agent wherein said azine enhancer comprises less than 0.005 parts mole/mole total basis of azine compounds having a hydrogen atom bonded to a nitrogen atom of the azine ring. It has generally been found that this hydrogen containing azine is a poisoning agent for the performance of the azine enhancer.

Η φωταυγής ανίχνευση των μορίων συνθετικής ή φυσικής προέλευσης όπως οι πρωτεϊ'νες και τα νουκλεϊνικά οξέα (DNA και RNA), καθώς επίσης και άλλα βιολογικά μόρια, αντικαθιστούν όλο και περισσότερο τη ραδιενεργό ανίχνευση ως μέθοδο επιλογής όπου η ευαισθησία είναι κρίσιμη. Σε τέτοιες δοκιμές, luminescence είναι συνήθως πραγματοποιημένο από την οξείδωση ενός υποστρώματος luminol ή isoluminol παρουσία ενός φορέα οξείδωσης όπως το υπεροξείδιο υδρογόνου ή η πηγή υπεροξειδίου υδρογόνου, όπως perborate, και έναν peroxidase καταλύτη όπως peroxidase χρένου. Για να λάβει τα χρήσιμα επίπεδα luminescence (π.χ., ανιχνεύσιμα επίπεδα) από τις συνήθεις τεχνικές, ένας luminescent ανυψωτής είναι επίσης παρών κατά τη διάρκεια της οξείδωσης. Έχει βρεθεί στην πρακτική της παρούσας εφεύρεσης ότι οι ανυψωτές azine περιέχουν μια ακαθαρσία που μειώνει τις ιδιότητες των φωταυγών λύσεων εργασίας δοκιμής. Η παρούσα εφεύρεση περιγράφει μια λύση εργασίας, μια διαδικασία τη λύση εργασίας, και τις εξαρτήσεις που περιέχουν τις λύσεις που μπορούν να αναμιχθούν για να διαμορφώσουν τις λύσεις εργασίας περιλαμβάνοντας μια λύση που είναι χρήσιμη για τη φωταυγή δοκιμή peroxidase της δραστηριότητας που περιλαμβάνει: α) τουλάχιστον ένα φωταυγές κυκλικό diacylhydrazide, β) τουλάχιστον ένας ανυψωτής azine, και γ) τουλάχιστον ένας πράκτορας oxidizine όπου ο εν λόγω ανυψωτής azine περιλαμβάνει λιγότερο από 0,005 μέρη τυφλοπόντικων/συνολική βάση τυφλοπόντικων των ενώσεων azine που έχουν ένα άτομο υδρογόνου συνδεμένο με ένα άτομο αζώτου του δαχτυλιδιού azine. Γενικά έχει διαπιστωθεί ότι αυτό το υδρογόνο που περιέχει το azine είναι πράκτορας δηλητηρίασης για την απόδοση του ανυψωτή azine.