Methods are provided for generating highly diverse libraries of expression vectors encoding fusion proteins such as single-chain antibodies via homologous recombination in yeast. The method comprises: transforming into yeast cells a linearized yeast expression vector having a 5'- and 3'-terminus sequence at the site of linearization and a library of insert nucleotide sequences that are linear and double-stranded; and having homologous recombination occur between the vector and the insert sequence such that the insert sequence is included in the vector in the transformed yeast cells. The insert sequence comprises a first nucleotide sequence encoding a first polypeptide subunit, a second nucleotide sequence encoding a second polypeptide subunit, a linker sequence encoding a linker peptide that links the first and second polypeptide subunits, and a 5'- and 3'-flanking sequence at the ends of the insert sequence which are sufficiently homologous to the 5'- and 3'-terminus sequences of the linearized yeast expression vector, respectively, to enable homologous recombination to occur. The first polypeptide subunit, the second polypeptide subunit, and the linker polypeptide are expressed as a single fusion protein; and the first and second nucleotide sequences each independently varies within the library of expression vectors.

Os métodos são fornecidos gerando bibliotecas altamente diversas dos vetores da expressão que codificam proteínas da fusão tais como os antibodies single-chain através do recombination homologous no fermento. O método compreende: transformando em pilhas do fermento um vetor linearized da expressão do fermento que tem uma seqüência 5' - e 3'-terminus no local do linearization e em uma biblioteca das seqüências do nucleotide da inserção que são lineares e double-stranded; e tendo o recombination homologous ocorra entre o vetor e a seqüência da inserção tais que a seqüência da inserção está incluída no vetor nas pilhas transformadas do fermento. A seqüência da inserção compreende uma primeira seqüência do nucleotide que codificam um primeiro subunit do polypeptide, uma segunda seqüência do nucleotide que codificam um segundo subunit do polypeptide, uma seqüência do linker que codificam um peptide do linker que ligue os primeiros e segundos subunits do polypeptide, e uma seqüência 5' - e 3'-flanking nos fins da seqüência da inserção que são suficientemente homologous ao 5' - e as seqüências 3'-terminus do vetor linearized da expressão do fermento, respectivamente, para permitir o recombination homologous de ocorrer. O primeiro subunit do polypeptide, o segundo subunit do polypeptide, e o polypeptide do linker são expressados como uma única proteína da fusão; e o primeiro e segundo nucleotide arranja em seqüência cada um varia independentemente dentro da biblioteca de vetores da expressão.