The development of general approaches for the isolation of efficient antivirals is becoming increasingly important. The genetic suppressor element (GSE) technology is an approach based on the functional expression and selection of efficient genetic inhibitors from random fragment libraries derived from a gene or genome of interest. We have applied this technology to isolate potent genetic inhibitors against the human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) The strategy employed involved the following steps: 1) fragmenting the HIV-1 genome into 100-700 base pair (bp) fragments; 2) inserting the fragments into expression vectors to form an expression library; 3) transferring the expression library into a population of cells (e.g., OM10.1) containing an inducible latent HIV-1 provirus; 4) selecting a subpopulation of cells which contain a subset of the expression library enriched for HIV-1 GSE by monitoring the expression of a cellular (e.g., CD4) or viral (e.g., p24) marker associated with HIV infection; 5) recovering the GSE from the selected cell population. The GSEs identified clustered in seven narrowly defined regions of the HIV-1 genome and were found to be functionally active. These elements are potential candidates for the gene therapy of AIDS. The developed approaches can be applied to other viral pathogens, as well as, for the identification of cellular genes supporting the HIV-1 life cycle.

Η ανάπτυξη των γενικών προσεγγίσεων για την απομόνωση των αποδοτικών antivirals γίνεται όλο και περισσότερο σημαντική. Η γενετική τεχνολογία στοιχείων καταπιεστών (GSE) είναι μια προσέγγιση βασισμένη στη λειτουργικές έκφραση και την επιλογή των αποδοτικών γενετικών ανασταλτικών παραγόντων από τις τυχαίες βιβλιοθήκες τεμαχίων που προέρχονται από ένα γονίδιο ή ένα γονιδίωμα ενδιαφέροντος. Έχουμε εφαρμόσει αυτήν την τεχνολογία για να απομονώσουμε τύπο 1 ιών τους ισχυρούς γενετικούς ανασταλτικούς παράγοντες ενάντια στον ανθρώπινης ανεπάρκειας αντισωμάτων (HIV-1) Η στρατηγική που υιοθετήθηκε βήματα περιέλαβε τα ακόλουθα: 1) τεμαχισμός του HIV-1 γονιδιώματος σε 100-700 τεμάχια ζευγαριού (bp) βάσεων 2) παρεμβολή των τεμαχίων στα διανύσματα έκφρασης για να διαμορφώσει μια βιβλιοθήκη έκφρασης 3) μεταφορά της βιβλιοθήκης έκφρασης σε έναν πληθυσμό των κυττάρων (π.χ., OM10.1) που περιέχουν inducible λανθάνον HIV-1 provirus 4) επιλέγοντας ένα υποσύνολο πληθυσμού των κυττάρων που περιέχουν ένα υποσύνολο της βιβλιοθήκης έκφρασης που εμπλουτίζεται για HIV-1 GSE με τον έλεγχο της έκφρασης ενός κυψελοειδούς (π.χ., CD4) ή προερχόμενου από ιό (π.χ., p24) δείκτη που συνδέεται με τη μόλυνση HIV 5) ανάκτηση του GSE από τον επιλεγμένο πληθυσμό κυττάρων. Το GSEs που προσδιορίστηκε συγκεντρώθηκε σε επτά λεπτομερώς καθορισμένες περιοχές του HIV-1 γονιδιώματος και βρέθηκε για να είναι λειτουργικά ενεργό. Αυτά τα στοιχεία είναι πιθανοί υποψήφιοι για τη θεραπεία γονιδίων του AIDS. Οι αναπτυγμένες προσεγγίσεις μπορούν να εφαρμοστούν σε άλλα προερχόμενα από ιό παθογόνα, καθώς επίσης και, για τον προσδιορισμό των κυψελοειδών γονιδίων που υποστηρίζουν το HIV-1 κύκλο ζωής.