The present invention relates to a method of amplifying a nucleic acid
sequence present in a first strand of a double stranded nucleic acid
molecule wherein said molecule incorporates an unmodified recognition site
for a restriction enzyme capable of cutting the first strand at the 5' end
of the sequence therein to be amplified and leaving the 3'-cut region of
the second strand projecting beyond the cut site in the first strand. The
method further comprises treating said molecule with said enzyme in the
presence of a strand displacing polymerase and unmodified nucleotides for
incorporation in an extending nucleic acid strand such that there is or
becomes hybridised to said 3'-end region of the second strand a primer
sequence complementary thereto whereby said primer sequence is extended in
the 5' to 3' direction using the second strand as a template to regenerate
the restriction endonuclease cut site and displace the sequence to be
amplified.
De onderhavige uitvinding heeft op een methode om een nucleic zuuropeenvolging te vergroten huidig betrekking in een eerste bundel van een dubbele vastgelopen nucleic zuurmolecule waarin de bovengenoemde molecule een ongewijzigde erkenningsplaats voor een beperkingsenzym geschikt om de eerste bundel bij ' te snijden eind 5 van de opeenvolging daarin te vergroten en 3'-besnoeiing gebied te verlaten dat van de tweede bundel opneemt voorbij de besnoeiingsplaats het ontwerpt in de eerste bundel. De methode bestaat verder uit het behandelen van bovengenoemde molecule met bovengenoemd enzym in aanwezigheid van een bundel die polymerase en ongewijzigde nucleotiden voor integratie in een het uitbreiden zich nucleic zuurbundel verplaatst dusdanig dat er zijn of gekruist aan bovengenoemd 3'-eind gebied van de tweede bundel een daaraan bijkomende inleidingsopeenvolging wordt waardoor de bovengenoemde inleidingsopeenvolging in richting 5 ' tot 3 ' gebruikend de tweede bundel wordt uitgebreid aangezien een malplaatje om beperkingsendonuclease te regenereren plaats sneed en de te vergroten opeenvolging verplaatst.
