This invention discloses methods, compositions and kits for the detection
of extremely low levels of nucleic acid, cells and cellular material in
biological samples. The nucleic acid detection systems utilize either the
pyrophosphorolysis reaction catalyzed by various polymerases or nuclease
digestion coupled with pyrophosphorylation catalyzed by
phosphoribosylpyrophosphate synthetase to produce either
deoxyribonucleoside triphosphates or ribonucleoside triphosphates. dNTPs
are transformed to ATP by the action of nucleoside diphosphate kinase. The
ATP produced by these reactions may be detected by luciferase or NADH
based detection systems. If more sensitive detection is required, schemes
for the amplification of NTPs and dNTPS are provided. A detection system
for cells or cellular material in a sample is provided wherein AMP and a
high energy phosphate donor added to a sample are converted to ATP by the
action of endogenous enzymes, followed by detection of the ATP.
Αυτή η εφεύρεση αποκαλύπτει τις μεθόδους, τις συνθέσεις και τις εξαρτήσεις για την ανίχνευση των εξαιρετικά χαμηλών επιπέδων νουκλεϊνικού οξέος, κυττάρων και κυψελοειδούς υλικού στα βιολογικά δείγματα. Τα συστήματα ανίχνευσης νουκλεϊνικού οξέος χρησιμοποιούν είτε την αντίδραση pyrophosphorolysis που καταλύεται από τις διάφορες πολυμεράσεις είτε την πέψη νουκλεάσης που συνδέεται με το pyrophosphorylation που καταλύεται από synthetase phosphoribosylpyrophosphate για να παραγάγει είτε τα τριφωσφορικά άλατα είτε ribonucleoside τα τριφωσφορικά άλατα dNTPs deoxyribonucleoside μετασχηματίζονται στο ATP από τη δράση diphosphate νουκλεοζιτών της κινάσης. Το ATP που παράγεται από αυτές τις αντιδράσεις μπορεί να ανιχνευθεί από το luciferase ή βασισμένα τα nadh συστήματα ανίχνευσης. Εάν η πιό ευαίσθητη ανίχνευση απαιτείται, τα σχέδια για την ενίσχυση NTPs και dNTPS παρέχονται. Ένα σύστημα ανίχνευσης για τα κύτταρα ή το κυψελοειδές υλικό σε ένα δείγμα παρέχεται όπου amp και ένας υψηλός χορηγός ενεργειακού φωσφορικού άλατος που προστίθεται σε ένα δείγμα μετατρέπονται στο ATP τη δράση των ενδογενών ενζύμων, που ακολουθείται από από την ανίχνευση του ATP.
