The present invention is directed generally to activating gene expression or causing over-expression of a gene by recombination methods in situ. The invention also is directed generally to methods for expressing an endogenous gene in a cell at levels higher than those normally found in the cell. In one embodiment of the invention, expression of an endogenous gene is activated or increased following integration into the cell, by non-homologous or illegitimate recombination, of a regulatory sequence that activates expression of the gene. In another embodiment, the expression of the endogenous gene may be further increased by co-integration of one or more amplifiable markers, and selecting for increased copies of the one or more amplifiable markers located on the integrated vector. In another embodiment, the invention is directed to activation of endogenous genes by non-targeted integration of specialized activation vectors, which are provided by the invention, into the genome of a host cell. The invention also provides methods for the identification, activation, isolation, and/or expression of genes undiscoverable by current methods since no target sequence is necessary for integration. The invention also provides methods for isolation of nucleic acid molecules (particularly cDNA molecules) encoding a variety of proteins, including transmembrane proteins, and for isolation of cells expressing such transmembrane proteins which may be heterologous transmembrane proteins. The invention also is directed to isolated genes, gene products, nucleic acid molecules, to compositions comprising such genes, gene products and nucleic acid molecules, and to vectors and host cells comprising such genes and nucleic acid molecules, that may be used in a variety of therapeutic and diagnostic applications. Thus, by the present invention, endogenous genes, including those associated with human disease and development, may be activated and isolated without prior knowledge of the sequence, structure, function, or expression profile of the genes.

De onderhavige uitvinding wordt geleid over het algemeen aan activerende genuitdrukking of ter plaatse het veroorzaken van over-expression van een gen door nieuwe combinatiemethodes. De uitvinding wordt ook geleid over het algemeen aan methodes om een endogeen gen in een cel uit te drukken bij niveaus hoger dan die normaal gevonden in de cel. In één belichaming van de uitvinding, wordt de uitdrukking van een endogeen gen geactiveerd of na integratie in de cel, met niet homologe of illegitimate nieuwe combinatie, van een regelgevende opeenvolging verhoogd die uitdrukking van het gen activeert. In een andere belichaming, kan de uitdrukking van het endogene gen verder met mede-integratie worden verhoogd van één of meerdere amplifiable tellers, en het selecteren voor verhoogde exemplaren van de één of meerdere amplifiable tellers die op de geïntegreerde vector worden gevestigd. In een andere belichaming, wordt de uitvinding geleid aan activering van endogene genen door niet-gerichte integratie van gespecialiseerde activeringsvectoren, die door de uitvinding, in het genoom van een gastheercel worden verstrekt. De uitvinding verstrekt ook methodes voor de identificatie, de activering, de isolatie, en/of de uitdrukking van genen undiscoverable door huidige methodes aangezien geen doelopeenvolging voor integratie noodzakelijk is. De uitvinding verstrekt ook methodes voor isolatie van nucleic zuurmolecules die (in het bijzonder molecules DNA) een verscheidenheid van proteïnen, met inbegrip van transmembraanproteïnen, en voor isolatie van cellen coderen die dergelijke transmembraanproteïnen uitdrukken die heterologe transmembraanproteïnen kunnen zijn. De uitvinding wordt ook geleid aan geïsoleerde genen, genproducten, nucleic zuurmolecules, aan samenstellingen bestaand uit dergelijke genen, genproducten en nucleic zuurmolecules, en aan vectoren en gastheercellen bestaand uit dergelijke genen en nucleic zuurmolecules, die in een verscheidenheid van therapeutische en kenmerkende toepassingen kunnen worden gebruikt. Aldus, door de onderhavige uitvinding, kunnen de endogene genen, met inbegrip van die verbonden aan menselijke ziekte en ontwikkeling, zonder vroegere kennis van de opeenvolging, de structuur, de functie, of uitdrukkingsprofiel van de genen worden geactiveerd en worden geïsoleerd.