Methods of nucleic acid amplification with external controls are provided that verify the absence or presence of specific target sequences, and correct primers and probes. A single-stranded, external control polynucleotide is amplified with primers of the same sequence as target primers. Probes with detectable labels and sequences specific for target and external control polynucleotides allow for detection and measurement. The primers and the detectable probe are adjacent or substantially adjacent when hybridized to the external control polynucleotide. Target and control amplicons may be detected by increased fluorescence induced by polymerase-mediated 5' nuclease cleavage or hybridization of a self-quenching probe complementary to both target and external control polynucleotides. A kit of PCR reagents can be dispensed into vessels for rapid and accurate nucleic acid amplification assay, with real-time or end-point measurements. The amplification control reagents, kits, and methods of the present invention provide positive and negative control tests which can be conducted concurrently with target amplification. Allelic differences at genetic loci can be detected, including single nucleotide polymorphisms (SNP).

Οι μέθοδοι ενίσχυσης νουκλεϊνικού οξέος με τους εξωτερικούς ελέγχους παρέχονται που ελέγχουν την απουσία ή την παρουσία συγκεκριμένων ακολουθιών στόχων, και τους σωστούς εγχυτήρες και τους ελέγχους. Single-stranded, εξωτερικό polynucleotide ελέγχου ενισχύεται με τους εγχυτήρες της ίδιας ακολουθίας με τους εγχυτήρες στόχων. Οι έλεγχοι με τις ανιχνεύσιμες ετικέτες και τις ακολουθίες συγκεκριμένες για το στόχο και εξωτερικά polynucleotides ελέγχου επιτρέπουν την ανίχνευση και τη μέτρηση. Οι εγχυτήρες και ο ανιχνεύσιμος έλεγχος είναι παρακείμενοι ή ουσιαστικά παρακείμενοι όταν υβριδοποιείται εξωτερικό polynucleotide ελέγχου. Ο στόχος και ο έλεγχος amplicons μπορούν να ανιχνευθούν από τον αυξανόμενο φθορισμό που προκαλείται από "σχίσιμο νουκλεάσης πολυμεράση-μεσολαβημένα 5 ή υβριδοποίηση ενός self-quenching ελέγχου συμπληρωματικού και στο στόχο και εξωτερικά polynucleotides ελέγχου. Μια εξάρτηση pcr των αντιδραστηρίων μπορεί να διανέμει στα σκάφη για τη γρήγορη και ακριβή δοκιμή ενίσχυσης νουκλεϊνικού οξέος, με τις μετρήσεις πραγματικού χρόνου ή σημείου τέλους. Τα αντιδραστήρια, οι εξαρτήσεις, και οι μέθοδοι ελέγχου ενίσχυσης της παρούσας εφεύρεσης παρέχουν τις θετικές και αρνητικές δοκιμές ελέγχου που μπορούν να διευθυνθούν ταυτόχρονα με την ενίσχυση στόχων. Οι αλληλόμορφες διαφορές στους γενετικούς γεωμετρικούς τόπους μπορούν να ανιχνευθούν, συμπεριλαμβανομένων των ενιαίων πολυμορφισμών νουκλεοτίδας (SNP).

 
Web www.patentalert.com

< Bus system having both serial and parallel busses

< SNP detection

> Detection using degradation of a tagged sequence

> Detection of glucokinase-linked early-onset non-insulin-dependent diabetes mellitus

~ 00030