This invention discloses methods, compositions and kits for the detection
of extremely low levels of nucleic acid, cells and cellular material in
biological samples. The nucleic acid detection systems utilize either the
pyrophosphorolysis reaction catalyzed by various polymerases or nuclease
digestion coupled with pyrophosphorylation catalyzed by
phosphoribosylpyrophosphate synthetase to produce either
deoxyribonucleoside triphosphates or ribonucleoside triphosphates. dNTPs
are transformed to ATP by the action of nucleoside diphosphate kinase. The
ATP produced by these reactions may be detected by luciferase or NADH
based detection systems. If more sensitive detection is required, schemes
for the amplification of NTPs and dNTPS are provided. A detection system
for cells or cellular material in a sample is provided wherein AMP and a
high energy phosphate donor added to a sample are converted to ATP by the
action of endogenous enzymes, followed by detection of the ATP.
Deze uitvinding onthult methodes, samenstellingen en uitrustingen voor de opsporing van uiterst lage niveaus van nucleic zuur, cellen en cellulair materiaal in biologische steekproeven. De systemen van nucleic zuuropsporing gebruiken of de pyrophosphorolysisreactie die door diverse polymerase of nucleasespijsvertering wordt gekatalyseerd die aan pyrophosphorylation wordt gekoppeld die door phosphoribosylpyrophosphatesynthetase wordt gekatalyseerd of deoxyribonucleosidetrifosfaat of ribonucleoside trifosfaat dNTPs te produceren worden omgezet aan ATP door de actie van het kinase van het nucleosidedifosfaat. Atp die door deze reacties wordt geproduceerd kan door luciferase of NADH gebaseerde opsporingssystemen worden ontdekt. Als de gevoeligere opsporing wordt vereist, worden de regelingen voor de versterking van NTPs en dNTPS verstrekt. Een opsporingssysteem voor cellen of cellulair materiaal in een steekproef wordt verstrekt waarin AMP en een donor van het hoge energiefosfaat die aan een steekproef wordt toegevoegd worden omgezet in ATP door de actie van endogene enzymen, die door opsporing van ATP wordt gevolgd.
