A method and a kit for detecting a mutation from a non-mutated sequence of
a target polynucleotide in a sample, by using a mismatch binding protein.
The method comprises: a) providing non-mutated and mutated target
polynucleotide; b) forming duplex of the non-mutated and mutated single
strands of the target polynucleotide in a); c) adding a single strand
binding protein to the polynucleotide from b); d) incubating the mismatch
binding protein with an activating agent; e) adding the incubated mismatch
binding protein from d) to the polynucleotide from c), whereby the
mismatch binding protein binds to the duplex formed by one non-mutated and
one mutated single strand of the target polynucleotide; f) detecting the
presence of any mismatch binding protein bound to the target
polynucleotide. The kit comprises: a) single strand binding protein, b)
activator for mismatch binding protein; c) mismatch binding protein; d)
amplification primer(s); e) solid support for binding of target
polynucleotide or mismatch binding protein.
Un metodo e un corredo per la rilevazione della mutazione da una sequenza non-mutata di un polynucleotide dell'obiettivo in un campione, usando una proteina obbligatoria del disadattamento. Il metodo contiene: a) fornire polynucleotide non-mutato e mutato dell'obiettivo; b) formare duplex singoli dei fili non-mutati e mutati del polynucleotide dell'obiettivo da a); c) aggiungere una proteina obbligatoria del singolo filo al polynucleotide da b); d) incubare la proteina obbligatoria del disadattamento con un attivante; e) aggiungendo la proteina obbligatoria incubata del disadattamento da d) al polynucleotide da c), per cui la proteina obbligatoria del disadattamento si lega al duplex costituito da un singolo filo non-mutato ed un mutato del polynucleotide dell'obiettivo; la f) che rileva la presenza di tutta la proteina obbligatoria del disadattamento limita al polynucleotide dell'obiettivo. Il corredo contiene: a) proteina obbligatoria del singolo filo, b) attivatore per la proteina obbligatoria del disadattamento; c) proteina obbligatoria del disadattamento; d) primer(s) di amplificazione; e) sostegno solido il grippaggio del polynucleotide dell'obiettivo o della proteina obbligatoria del disadattamento.
