Disclosed herein are methods and reagents kits forth quantitative in vitro determination of the functional determination of multi-drug resistance in cells, as well as for the clinical screening of potential modulators of multi-drug resistant transport activity in cells. The method of the invention is based on the measurement of the accumulation rate of free calcein within the cells of the specimen (advantageously by flourescence measurement), after exposing the cells in vitro to a cell permeable form of calcein that is a good substrate for MDR proteins present in the sample. The cell permeable form of calcein is converted within the cell by intracellular enzymes to free calcein. Comparison of free calcein accumulation in the presence and absence of a potential inhibitor of transport activity permits the rapid screening of such inhibitors. Additionally, evaluation of free calcein accumulation rates in the presence of inhibitors of all MDR transport in comparison with calcein accumulation rates in the presence of selective inhibitors of MDR transport permits the evaluation of the functional type of MDR being exhibited.

Sono rilevati qui i metodi e la determinazione in vitro quantitativa dei corredi dei reagenti avanti della determinazione funzionale di resistenza della multi-droga in cellule, così come per la selezione clinica dei modulatori potenziali di attività resistente di trasporto della multi-droga in cellule. Il metodo dell'invenzione è basato sulla misura del tasso di accumulazione della calceina libera all'interno delle cellule dell'esemplare (vantaggiosamente tramite la misura di flourescence), dopo avere esposto le cellule in vitro ad una forma permeabile delle cellule della calceina che è un buon substrato per le proteine di MDR presenti nel campione. La forma permeabile delle cellule della calceina è convertita all'interno della cellula dagli enzimi intracellulari per liberare la calceina. Il confronto di accumulazione libera della calceina nella presenza e di assenza di un inibitore potenziale di attività di trasporto consente la selezione veloce di tali inibitori. Ulteriormente, la valutazione dei tassi liberi di accumulazione della calceina in presenza degli inibitori di tutto il trasporto di MDR in paragone ai tassi di accumulazione della calceina in presenza degli inibitori selettivi di trasporto di MDR consente la valutazione del tipo funzionale di MDR che è esibito.

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