Polypeptides separated on a gel are identified by cleaving the separated polypeptides with an immobilized cleaving reagent such as an enzyme, and transferring the fragments to a hydrophobic collection layer where they are analyzed. A hydrophilic membrane containing an immobilized protease such as trypsin is provided between an electrophoresis gel and a hydrophobic membrane to form an electroblotting "sandwich". Polypeptides separated on the gel by electrophoresis are electroblotted from the gel through the hydrophilic membrane where they are cleaved by the protease into fragments, and the fragments are collected on the hydrophobic membrane where they are identified such as by MALDI-TOF MS analysis. From identification of the fragments, the polypeptide from which they came is identified. The hydrophilic membrane may be provided with functional groups to which the protease is immobilized by covalent bonding. Free residual functional groups not bound to the protease are capped to prevent their reaction with the polypeptide. The functional groups may be activated carbonyl groups, carboxylic acid groups or carboxylic acid derivative groups capable of reacting with an amino group of an enzyme. A kit for use in carrying out the electroblotting is formed containing the cleaving reagent immobilized on the hydrophilic membrane, and the hydrophobic collection layer. The immobilized cleaving reagent and hydrophobic layer may be in separate containers or in the same container.

Polypeptide trennten sich auf einem Gel werden gekennzeichnet, indem sie die getrennten Polypeptide mit einem stillgestellten zerspaltenden Reagens wie einem Enzym zerspalteten, und die Fragmente auf eine hydrophobe Ansammlung bringend, überlagern Sie, wo sie analysiert werden. Eine hydrophile Membrane, die eine stillgestellte Protease wie Trypsin enthält, wird zwischen einem Elektrophoresegel und einer hydrophoben Membrane zur Verfügung gestellt, um ein electroblotting "Sandwich" zu bilden. Die Polypeptide, die auf dem Gel durch Elektrophorese getrennt werden, sind electroblotted vom Gel durch die hydrophile Membrane, in der sie durch die Protease in Fragmente zerspaltet werden, und die Fragmente auf der hydrophoben Membrane gesammelt werden, in der sie wie durch MALDI-TOF MS Analyse gekennzeichnet werden. Von der Kennzeichnung der Fragmente, wird das Polypeptid, von dem sie kamen, gekennzeichnet. Die hydrophile Membrane kann mit Funktionsgruppen versehen werden, zu denen die Protease durch kovalentes Abbinden stillgestellt wird. Die freien Restfunktionsgruppen, die nicht zur Protease gesprungen werden, werden mit einer Kappe bedeckt, um ihre Reaktion mit dem Polypeptid zu verhindern. Die Funktionsgruppen können aktivierte Karbonylgruppen, Gruppen der karboxylhaltigen Säure oder die karboxylhaltigen Säurederivatgruppen sein, die zum Reagieren mit einer Aminogruppe eines Enzyms fähig sind. Ein Installationssatz für Gebrauch, wenn man das Electroblotting durchführt, wird das zerspaltende Reagens, das gebildet auf der hydrophilen Membrane stillgestellt werden, und die hydrophobe Ansammlung Schicht enthalten. Das stillgestellte zerspaltende Reagens und die hydrophobe Schicht können in den unterschiedlichen Behältern oder im gleichen Behälter sein.